关键词：原癌基因 c-erbB-1 c-erbB-2 神经胶质瘤 基因表达
0 引言
原癌基因c-erbB-1编码表皮生长因子受体(EGFR), EGFR是一分子质量为170 ku的跨膜糖蛋白;c-erbB-2 (HER-2/neu)编码另一分子质量为185 ku的跨膜糖蛋白P185. EGFR和P185有50%的同源性,二者同属Ⅰ型酪氨酸激酶受体家族,具有强大的促有丝分裂和细胞增殖作用［1,2］. 有资料显示c-erbB-1和c-erbB-2蛋白的高表达与人多种肿瘤的恶性生物学行为关系密切. 在人脑胶质瘤中,有关二者共表达的研究报道较少，且意见分歧很大［3～6］. 我们采用免疫组化方法分别检测c-erbB-1和c-erbB-2在人脑胶质瘤中的表达，以探讨二者与人脑胶质瘤发生发展的关系.
1 材料和方法
1.1 组织标本 52例人脑胶质瘤及8例正常人脑组织标本均选自西京医院病理科1990-1996年存档的石蜡包埋组织. 脑胶质瘤按1990年WHO脑肿瘤分类及分级标准，经病理组织学检查确诊，其中Ⅰ级12例，包括原纤维型星形细胞瘤5例，毛细胞型星形细胞瘤4例，室管膜瘤3例；Ⅱ级16例，包括原浆型星形细胞瘤9例，原纤维型星形细胞瘤7例；Ⅲ级11例，包括间变型星形细胞瘤8例，间变型室管膜瘤3例，Ⅳ级13例，包括多形性胶质母细胞瘤10例，髓母细胞瘤3例. 标本均经100 mL/L福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚4 μm，贴于涂有APES防脱片胶的载玻片，烤片后备用.
1.2 细胞系 2株人脑胶质瘤细胞系为国内所建，包括星形细胞瘤细胞系SHG44及多形性胶质母细胞瘤细胞系BT325. 细胞爬片于含100 mL/L胎牛血清的RPMI 1640培养基中，在37 ℃、饱和湿度及50 mL/L CO2条件下培养，待细胞接近长满盖玻片时取出，用PBS洗涤，丙酮固定后备用.
1.3 主要试剂 小鼠抗人c-erbB-1单抗和小鼠抗人c-erbB-2单抗均为Santa Cruz公司产品，c-erbB-1单抗由本校基础部免疫学教研室金伯泉教授惠赠,SABC试剂盒购自武汉博士德公司，二氨基联苯胺(DAB)为Sigma公司产品.
1.4 免疫组化SABC法 石蜡切片常规脱蜡至水，浸泡于10 mmol/L枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中,置微波炉内加热(300 W)，煮沸10 min以修复抗原. 细胞爬片于-20 ℃及室温反复冻融3次，以增加膜通透性. 以下步骤按说明书进行,用DAB显色,苏木素复染. 分别用PBS和正常羊血清代替一抗，作为空白对照和替代对照；以c-erbB-1和c-erbB-2蛋白表达阳性的乳腺癌组织作为阳性对照.
1.5 结果判断 c-erbB-1和c-erbB-2蛋白免疫组化阳性均为胞浆和（或）胞膜呈棕黄色显色. 根据Agosti等和Schwechheimer等［3,5］的方法,每张切片随机选择10个高倍视野，记数500～1 000个细胞. 染色结果综合阳性细胞数量及染色反应强度两个方面，进行半定量处理，分别记作0～3分. 阳性细胞数＜35%为1分，35%～70%为2分，＞70%为3分；染色反应强度以多数细胞为准. 根据两项指标的积分数分为四级：0分为-，2分为+，3～4分为，5～6分为.
1.6 统计学分析 采用χ2检验，Ridit分析.
2 结果
2.1 c-erbB-1蛋白免疫组化结果 c-erbB-1阳性物质定位于胞浆和胞膜，以胞浆为强，呈棕黄色细颗粒样，阳性细胞呈散在,局灶或弥漫状分布(Fig 1，2). 脑胶质瘤c-erbB-1蛋白总阳性率为73.1%，2株人脑胶质瘤细胞系全部阳性，8例正常人脑组织均为阴性；c-erbB-1蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为50.0%,68.8%,81.8%和92.3%,低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤(60.7%)和高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤(87.5%)间阳性率差异显著（P＜0.05）,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤相邻级别间阳性率无显著差别（P＞0.05);Ridit分析，c-erbB-1表达强度在高恶性度和低恶性度胶质瘤间差异极显著（P＜0.01)，Ⅰ～Ⅱ级及Ⅱ～Ⅲ级间差异亦显著（P＜0.05，Tab 1）.
2.2 c-erbB-2蛋白免疫组化结果 c-erbB-2阳性物质定位和分布与c-erbB-1基本一致(Fig 3, 4). 脑胶质瘤c-erbB-2蛋白总阳性率为86.5%，2株人脑胶质瘤细胞系全部阳性，8例正常人脑组织均为阴性；c-erbB-2蛋白在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织中阳性率分别为75.0%, 87.5%, 90.9%和92.3%, 低恶性度胶质瘤(82.1%)和高恶性度胶质瘤(91.7%)间以及Ⅰ～Ⅳ胶质瘤各级间阳性率均无显著性
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