鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对永生化人胚肾上皮细胞生长特性的影响

中华肿瘤杂志 1998年第5期第0卷 基础研究

作者：陈宜芳　郭辉玉　汪慧民　李满枝

单位：510120 广州，中山医科大学 孙逸仙纪念医院(陈宜芳)，微生物教研室［郭辉玉(导师)］，肿瘤研究所(汪慧民、李满枝)

　　关键词： 鼻咽肿瘤　　爱泼斯坦-巴尔病毒　　潜伏膜蛋白1基因　　上皮细胞

　　【摘要】　目的　研究鼻咽癌细胞系SUNE中EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)基因对上皮细胞生长特性的影响, 探索LMP1在鼻咽癌发生中所起的作用。方法　用LMP1基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞, 检测LMP1的表达,观察细胞的生长状态、生长速度、在软琼脂中的集落形成能力及对裸鼠的致瘤能力。结果　被LMP1基因转染的细胞生长旺盛,丧失接触抑制,生长速度增快,在软琼脂中能够形成多个集落，并能在裸鼠体内成瘤。结论　LMP1基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，促进细胞的生长、增殖和转化，使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。

　　Effect of EBV latent membrane protein 1 gene isolated from human nasopharyngeal carcinoma cell line SUNE on the growth of immortalized epithelial cells　　Chen Yifang, Guo Huiyu, Wang Huimin, et al. Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510120

　　【Abstract】　Objective　To study the effect of EBV latent membrane protein (LMP1) gene isolated from human nasopharyngeal carcinoma cell line SUNE on the growth of epithelial cells and the role of LMP1 in the genesis of nasopharyngeal carcinomas. Methods　EBV LMP1 gene eukaryotic expression plasmid was transfected into human embryo kidney epitheial cells. Expression of LMP1 protein in the transfected cells was detected. Dynamic cell growth status, growth rate, ability of colony formation in soft agar and the tumorigenicity of the transfected cells in nude mice were studied. Results　The LMP1 gene transfected cells grew vigorously and rapidly, lost contact inhibition, formed more colonies in soft agar, developed tumors in nude mice. ConclusionLMP1 gene could alter the biological behaviours of epithelial cells, promote cell proliferation and transformation, and endows the transfected cells with growth characteristics like tumor cells.

　　【Subject words】　Nasopharyngeal neoplasms　　Epstein-Barr virus　　Latent numbrane protein 1 geneEpithelial cell

　　鼻咽癌(NPC)与EB病毒(epstein-barr virus,EBV)密切相关。EBV潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是NPC组织中表达的与细胞转化有关的蛋白^［1］,LMP1基因已被认为是病毒的一种癌基因。以往对LMP1的研究资料大多来自于EBV原型株B95-8细胞，近年来学者们已开始关注NPC组织中的LMP1的研究,并已发现不同地域来源、不同分化程度的NPC组织中，LMP1基因结构与功能似乎存在一定差异^［2,3］。中国广东省为世界上NPC的最高发区，中山医科大学肿瘤研究所建立了来自广东省患者的NPC体外传代细胞系SUNE。多项实验证明，该细胞携带有EBV, 我们从SUNE中扩增出EBV-LMP1全基因,并以B95-8细胞中LMP1为对照,同时建立了该基因的真核表达质粒。关于EBV-LMP1对B淋巴细胞的转化作用，已有较多研究^［4～6］，但关于LMP1对上皮细胞的影响，认识尚浅。NPC为上皮细胞来源的肿瘤，深入研究LMP1对上皮细胞的作用，将有助于探讨LMP1与NPC的关系。我们用LMP1基因真核表达质粒转染到人胚肾上皮细胞,观察LMP1基因对上皮细胞生长特性的影响，以探索LMP1在NPC发生中所起的作用。

材料与方法

　　1. EBV-LMP1基因真核表达质粒pcDNA3-(S)LMP1及pcDNA3-(B)LMP1:由本室制备。根据Gene Bank公布的EBV基因序列，利用Oligo引物分析软件，电脑辅助设计一对引物,用长片段DNA PCR扩增试剂盒(Expand^TM High Fidelity PCR System, Boehringer Mannheim公司产品)

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